随着抗体药物领域的高速发展，动物细胞培养工艺也在不断的更新和优化，培养规模更是从早期的百升级别扩大到万升级别。抗体药物的生产工艺如果从细胞复苏开始计算，细胞不断培养和扩增阶段占据了整个流程的大部分时间。因此，细胞培养工艺的优劣是抗体生产中最关键的因素之一。 抗体药物通过QbD的方法进行生产上游工艺的开发，利用实验设计（DoE）和高通量平行生物反应器等技术、设备的优势，高效的完成抗体实验室规模的研发工艺，尽早了解产品关键质量属性（CAQs）和关键工艺参数（CPP）之间的关系，以及确定研发工艺中的设计空间（Design Space）。一旦完成这些小规模研发工艺后，接下来就需要进行工艺的放大。理想情况下，高效的工艺放大能在2-4个月内完成从研发规模到中试/生产规模的过渡。如何实现高效的工艺转移和放大，是对整个工艺技术团队经验和水平严峻的考验。 工艺放大的目标是在细胞培养规模逐渐扩大的情况下，保证细胞在相对恒定的环境中稳定的生长以进行产物的表达。衡量的标准包括细胞密度、生长速率、活率、产物表达率和糖基化水平等多方面。在细胞培养工艺的放大过程中关键控制参数会分为两种类型。一种是和体积无关

几种常见的悬浮培养和放大工艺方式，分别是批次式培养、流加（补料）式培养基灌注式培养。批次式培养是指在生物反应器中一次性加入细胞培养基和接入细胞种子，在培养过程中除了调节培养环境的PH值和溶氧外，不补充培养基也不排出培养基，直至培养过程结束。批次式培养的生长代谢环境相对是一个固定环境，不添加任何营养成分，能够观察细胞.

狭义的说,DCS 主要用于过程自动化,PLC 主要用于工厂自动化(生产线),SCADA 主要针对广域的需求,如油田,绵延千里的管线. 如果从计算机和网络的角度来说,它们是统一的,之所以有区别,主要在应用的需求, DCS 常常要求高级的控制算法,如在炼油行业,PLC 对处理速度要求高,因为经常用在联锁上, 甚至是故障安全系统,SCADA 也有一些特殊要求,如振动监测,流量计算,调峰调谷等

1. 谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？   L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－ 谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。   2. 什么培养基中可以省去加酚红？   酚红在培养基中被用来作为PH 值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。   3. 用台盼兰计数活细胞？   用无血清培养基把细胞悬液稀释到 200－2000 个/毫升，在 0.1 毫升的细胞中加入 0.1 毫升的 0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。   4. 消除组织培养的污染？   当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制

将重组全人源抗CD20单克隆抗体基因转入宿主细胞（中国仓鼠卵巢细胞CHO-S），经过筛选、鉴定，得到重组工程细胞。细胞库的建立、传代及保存、细胞检定均符合《中国药典》现行版“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”的规定。

一、前期准备 1、 接种前五天左右，开始复苏准备种子细胞。 2、 接种前四天左右，确认相关操作具体执行情况，如：测糖试剂盒、计数板、灭菌的培养基和葡萄糖及NaHCO3并做检菌（无菌检验，4天后如若无菌即可用）、气体钢瓶等。PBS 800ml电极灭菌用；无检过的细胞培养液5L及浓缩液500ml；300ml 7.5%NaHCO3及200g/L葡萄糖溶液300ml，储存于4℃，在使用时提前放入37℃恒温室预热。 3、 接种前三天，各气体及减压阀管路准备,管子用耐压管。 4、 接种前两天，电极校准（准备4.01和7.0的校准液放于室温、两根精度0.1的温度计、饱和Na2SO3溶液、两杯冷、热水，操作详见说明书）。包好锡箔纸，放进灭菌罐里，孔对准，灭菌罐包好锡箔纸高压灭菌。冷却后，待用。 5、 接种前两天，袋子检查，所有耗材记录批次、充气检漏（将所有卡板卡死，塑料螺丝拧紧，充气充到手指几乎压不下去），至少检8h。 6、 接种前两天，接头、接种瓶、碱瓶、葡萄糖瓶等瓶塞管路接头制备及灭菌。 7、 接种前一天装罐，在超净台内装好PH、DO、T电极，并在台内连好酒精袋和取样器，装罐（详见说

我们说下除菌过滤器冗余的问题。事实上，部分企业确实是有采用双级冗余除菌过滤器的，但更多的还是采用单级过滤器的方式。在一个有着完善质量体系的药厂或研究机构看来，做出的判断和对策一定是基于风险评估的。对于供应的空气、氧气、氮气、二氧化碳来说，在连接到生物反应器进气口之前，如果已经经过了除油、除尘和去湿，那在保证滤芯完整性的前提下（避免背压、避免培养基反串），一级过滤器已经可以满足除菌的要求了。相反，如果对滤芯的品质、预处理单元的效果以及控制系统有顾虑，那设置冗余除菌过滤器还是可以非常好的降低风险。同样的道理，如果预处理效果比较好，就不用担心会有水膜产生，进气过滤器就不需要电加热器，因为电加热会带来另外一个问题——气体加热，会导致细胞“中暑”。 其次，关于防止培养基反串的措施，单向阀无疑是一个非常具有性价比的措施。但是单向阀的选型非常重要。因为这个单向阀安装在过滤器出口、气泡发生器的入口，所以需要保证无菌，一是结构的无菌，二是在SIP之后要能够保证蒸汽冷凝水的自排净。如果做不到这两点，不但起不到保护过滤器的作用，还会带来新的污染点。此外，也可以通过合理的管道阀门设计配合自动系统，保证在任何

前面两期我们分别介绍了生物反应器和罐体和搅拌装置。这一期文章，我们将在生物反应器的“呼吸道系统”进行探讨。  本期的主题是生物反应器的通气设计。通气设计直接决定了溶解氧（以下简称DO）是否能够满足生物反应器内细胞生长和生产的需要，这个参数也是直接判断一个生物反应器品质的一个关键性的参数。 下面，佰小维将从硬件设计和软件设计两个层面与大家一同探讨。

氧含量和pH值是生物工程中 重要的化工过程参数，需要对其进行监测。两者都会对细胞生长速度、产品的产量和质量产生着重要的影响。因此要使各个批次的产品质量保持一致，测量系统的选择非常重要。其中，安装、保养和系统安全性是用户在使用传感器时要特别考虑的因素。 近年来，光学传感器（如图1所示）主要用于氧气的测量，与安培传感器相比，它具有以下几个优势：

这一期我们主要讲搅拌。如果罐体是生物反应器的脸，帅不帅看得见，那搅拌就好比是足球运动员的脚，是用来吃饭的家伙。能有多少钱吃饭得看水平的高低。 搅拌是用来实现传质传热最重要的装置！事实上，良好的搅拌式生物反应器需要解决两个关键问题：流场混合的均匀性和流场剪切力对细胞的影响，在降低流场剪切作用以及满足流场混合效果的前提下，才能保证细胞的健康生长和表达。